فایل بای | FileBuy
مرجع خرید و دانلود گزارش کار آموزی ، گزارشکار آزمایشگاه ، مقاله ، تحقیق ، پروژه و پایان نامه های کلیه رشته های دانشگاهیفایل بای | FileBuy
مرجع خرید و دانلود گزارش کار آموزی ، گزارشکار آزمایشگاه ، مقاله ، تحقیق ، پروژه و پایان نامه های کلیه رشته های دانشگاهیدانلود بررسی ایمنی زایی ژنهای L7L12 و P39 در موشهای Balac 65ص
| دسته بندی | پزشکی |
| فرمت فایل | zip |
| حجم فایل | 46 کیلو بایت |
| تعداد صفحات فایل | 59 |
تعداد صفحات : 59 صفحه
فصل دوم هدف از این تحقیق بررسی ایمنی زایی ژنهای L7/L12 و P39 در موشهای Balac است.
بنابراین پس از جداسازی و تکثیر ژنهای فوق مراحل زیر در این تحقیق انجام گرفت.
1- لکون نمودن ژنهای فوق در یک ناقل انتقال دهنده Cleaning vector 2- تعیین ترادف نوکلئوتیدی ژنهای جداشده و مقایسه آن با ژنهای L7/L12 3- کلون نمودن ژنها در پلاسمید بیان کننده پروکاریونی Procaryotic expression vector 4- تولید و تخلیص پروتئینهای L7/L12 و P39 5- کلون نمودن آنها در پلاسمید بیان کننده اوکاریوتی Eucaryotic expression vector 6- هاری کردن پلاسمیدهای فوق از آندوتوکسین 7- تزریق پلاسمیدها، بسویه واکنش و سویه بیماریزا بروسلاآبورتوس به موش Balb/C 8- سنجشهای ایمونولوژیک باکتریها و پلاسمیدهایی که برای انجام این پایان نامه استفاده دشه اند بترتیب زیر می باشند: باکتریها: بروسلاآبورتوس سویه های 19S و 544 اشدیشیالکی سویه اشریشیالکی سویه BL21 – اشریشیاکی سویه BL21(DE3(Plyss پلاسمیرها: PGEX4T1 – PRT 28a – SK+(pSK) - Pblue Script-PCDNA3 جداسازی کروموزوم بروسلا آبورتوس 19S: برای تکثیر ج داسازی ژنهای L7/L12 و P39 ابتدا کروموزوم باکتری جداسازی گردید.
مواد: بافر TE: Tris – Hel 10mm EDTA 1.
0mm PH بافر را پس از تهیه برروی 8 تنظیم می نمائیم.
پروتئیناز K: CTAB/NaCl: Nacl 4.
1gr CTAB 10gr DDW 100ml (Final Volume) روش: ابتدا محیط برنسط برات را تهیه و استریل نموده و ml5 از محیط را با بروسط آبورتوس سویه 19S تلقیح می نمائیم.
پس 48 تا 72 ساعت باکتریها رشد کرده و کدورت مناسبی را پیدا می کند.
بقیه مراحل تخلیص کروموزوم بشرح زیر است: 1- 5/1 میلی لیتر از سوسپاستیون فوق را مدت 2 دقیقه در rpm5000 سانتریفوژ می نمائیم.
محلول رویی را دور می ریزیم.
2- Ml576 از بافر TE را بر روی رسوب باکتری اضافه کرده و رسوب را در بافر حل می نمائیم.
سپس ml30 از SDS(10%) و ml3 از پروئیناز K (mg/ml20) را افزوده و بمدت یکساعت در دمای 0C37 نگهداری می نمائیم.
3- پس از مخلوز Ml100 از (M5)NaCl از محلول CTAB/NaCl بمیزان Ml80 اضافه کرده و بمدت 10 دققیق در 0C65 انکوبه می کنیم.
4- هم حجم مخلوط بالا از ترکیب کلروفرم – ایزوآمیل (1/24) به مخلوط افزوده و سپس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در rpm10000 سانترفوژ می کنیم.
محلول رویی را به لوله دیگر منتقل می نمائیم.
5- هم حجم محلول روئی ترمیب فنل – کلروفرم – ایزوآمیل (1/24/25) پس از مخلوط بمدت 5 دقیقه در vpr10000 سانتریفوژ کرده و محلول رویی به لوله دیگری منتقل می نمائیم.
6- هم حجم محلول روئی ایزوپروپانل اضافه نموده و مخلوط می کنیم.
پس از چند دقیقه DNA کروموزومی ته نشین شده که می توان بات یک پیپت پاستور آنرا جمع آوری نمائیم.
7- رسوب DNA کروموزومی را با الکل 70% شستشو داده و پس از خشک شدن در مجاورت هوا در Ml100 از بافر TE حل می نمائیم.
بررسی کمی و کیفی DNA کروموزومی: برای تعیین خلوط کروموزوم باکتری از مواد و وسایل زیر استفاده میشود.
1- بافر PBE pH=8(10X) Tris – base 890mM Boric Acid 890mM EDTA 25mM 2- آگارز MP 3- تانک الکتروفورز افقی روش: ابتدا آگارز MP در بافر TBE(0.
5x) را بکم